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德國ChromoTek公司GFP trap和booster產品說明!北京樂博生物,優勢代理!
lebo / 2015-10-12
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德國ChromoTek公司GFP trap和booster產品說明!北京樂博生物,優勢代理!

 

北京樂博生物聯系方式:
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網站:
www.kmsly.club
地址:北京市海淀區清河三街95號同源大廈912室

 

德國ChromoTek公司成立于2008年,致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發與研究,公司擁有強大的研發團隊,有先進的生物制劑,主要主要使命是花費較少的時間和成本,使客戶獲得得高質量的實驗數據

  德國ChromoTek公司 聯合中國專業的生物技術服務提供商-BioTNT,針對中國市場的實際情況,推出全世界最可靠的GFP 相關產品。

 

ChromoTek的產品分類:

一、              Nano-Trap系列;以產品結合物為標準,包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列,還有96板系列;抗體結合物包括GFP TrapRFP TrapGST TrapDnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap

二、              Booster系列;含GFP booster RFP booster

三、              可用于HCA 實驗的Chromobodies(質粒或細胞系形式);

四、              高品質抗體(標簽蛋白抗體和普通抗體);

 

產品一:

GFP-Trap  —— 值得信賴的科研工具

Nano-Trap與agarose beads或者magnetic beads結合,在免疫沉淀或蛋白質相互作用的實驗中,可高效抓取或純化GFP或RPF融合蛋白。 (優點:三好三多)

優點一:抗體好---------Nano-Traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、極端穩定(70℃仍保持穩定),高親和力(高特異性性結合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優點等優點;GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65TTagGFP,不與RFP衍生蛋白結合。

優點二:形式好-------抗體結合了agarose beads(瓊脂糖珠子)或者magnetic beads(磁珠),在IP實驗,COIP ,pulldown,Chip實驗中可以直接取代特異性GFP 抗體+proteinA/G 瓊脂糖珠子;

優點三:效果好------孵化時間短(只需5-30min),能夠更好與結合,從細胞提取物或細胞器中定量分離GFP融合蛋白及結合因子

優點四:實驗應用多:被廣泛用于免疫沉淀、質譜分析、酶活測定、生物大分子相互作用/親和力實驗、染色質免疫沉淀(ChIP)、蛋白質相互作用分析;

優點五:產品多:有GFP TrapRFP TrapGST TrapDnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap NEW!更多Trap 新品,給您提供更多的科研工具!GFPRFPGST Trap作為標簽蛋白的特異性純化方法,Dnmt1-TrapMk2-TrapP53-TrapMdm4/ HdmX-Trap 是用于純化目的蛋白。

優點六:樣品類型多:mammalian cells(哺乳細胞);tissues/ organisms(組織/器官樣本);bacteria(細菌);yeast (酵母);plants (植物樣本)

 

 

僅需六個步驟,30min 僅需6個步驟30min 實驗Chromotek GFP-Trap?_A5大實驗應用



 → →收集細胞     細胞裂解      平衡beads      結合蛋白 ,加入裂解的細胞   →    清洗beads   →  洗脫蛋白

 

免疫沉淀

酶活測定

Co-IP

Pull down

ChIP

后期實驗

Western blot

酶活測定

沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠,western blot鑒定預測作用蛋白Y,或樣品利用質譜后續分析。

洗脫的復合物;同時進行GFP和第二標簽western blot 實驗。

交聯反應逆轉,DNA純化,DNA鑒定(如用QPCR 或者chip實驗),同普通CHIP   實驗

nano trap替代的產品

GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP單克隆/多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GST   標簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠

GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

目的

GFP蛋白樣品的富集;或后期實驗

可以用beads直接測定酶活

蛋白-蛋白相互作用,一般驗證體內的蛋白互作

蛋白-蛋白相互作用,一般驗證體外的蛋白互作

蛋白-DNA相互作用

(1)       實驗不同,裂解的細胞不同;pulldown 加入的是GFP融合蛋白和第二標簽融合蛋白的裂解物;chip實驗為細胞固定步驟,染色質斷裂步驟;

實驗不同,加入的裂解物不同;chip實驗加入的為斷裂的DNA-蛋白復合物;

 

(2)     GFP-Trap 用于IP 實驗Immunoprecipitation)(免疫沉淀)Co-IP 實驗(免疫共沉淀) 

 

 

Co-IP 實驗Co-Immunoprecipitation)(免疫共沉淀)原理圖

 

傳統IP

GFP-Trap用于IP

傳統Co-IP

GFP-Trap用于Co-IP

 

A

B

C

D

實驗原理

抗體與細胞裂解液或上清中相應蛋白結合后,再與蛋白A/GProteinA/G)或二抗偶聯的agarose珠子孵育,得到蛋白復合物,洗脫蛋白。

細胞裂解液或上清中的GFP融合蛋白與GFP-Trap孵育,得到蛋白復合物,洗脫蛋白。

細胞非變性條件下裂解,完整胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。結合的實驗原理同A/B

目的

得到純化的蛋白或進行后期實驗

同A

研究蛋白質相互作用

后期實驗

洗脫的蛋白采用SDS-Page 跑膠,采用GFP 抗體western blot進行鑒定。

沉淀的蛋白質復合物采用SDS-Page 跑膠,western blot 鑒定,也可利用質譜進行后續分析。

時間

長,超過一天

短,30min

同A

B

步驟

多,超過20個步驟

少,僅需6個步驟

同A

B

特異性

普通抗體特異性不高

羊駝抗體,特異性高

同A

B

使用產品

可選用特異性抗體 GFP單克隆或多克隆抗體+Protein A/G瓊脂糖微珠

GFP抗體-瓊脂糖珠子,RFP-TrapGST-TrapDnmt1-Trap

同A

B

適用性

通用方法,適合面寬

GFPRFPGSTDnmt1-Trap4個品種的標簽蛋白Trap 可選

同A

B

產物

純度不高

純度高,對比見下左圖

   


產品二:

 Nano-booster是利用Atto公司的優質熒光素共價結合到特異性GFP抗體上;當GFP 融合蛋白信號比較弱的時候,或者熒光蛋白變性后,具有再激活的作用。

 

在研究活細胞中蛋白定位和動力學的過程中是不是會有如下的困惑:

 

1.       固定樣品中細胞表達的熒光融合蛋白信號強度在生理表達水平通常很低?

2.       熒光蛋白的耐光性和量子效率達不到超分辨顯微鏡的要求(如:3D-SIM, STED STORM/ PALM)?

3.       許多細胞生物學方法如Hcl處理的BrdU檢測,EdU-Click-It處理或者熱變性的熒光原位雜交(FISH)會干擾熒光融合蛋白信號的檢測,需要重新激活GFP 信號

 

優點:

優點一:抗體好---------Nano-Boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段(VHHS);具有分子量小(15Kda)、極端穩定(70℃仍保持穩定),高親和力(高特異性性結合GFP蛋白),無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優點等優點;GFP抗體可以特異性結合綠色熒光蛋白的衍生物,如eGFP, wtGFP, GFP S65TTagGFP,不與RFP衍生蛋白結合。

優點二:Atto公司的優質熒光素,具有增強熒光的作用;

優點三:作用效果好:1、作為熒光增強劑使用;

2、對變性熒光蛋白具有再激活作用;

3、不僅能夠增強信號,還能夠增加熒光蛋白熒光穩定性。

 

優點四:產品多:不僅有GFP booster,還有RFP booster;

 

Nano Booster 產品應用:

1、產品實驗方法:免疫熒光(IF),免疫組化(IHC);

2、產品使用材料:細胞系,組織切片;

3、產品應用方向:熒光顯微鏡,激光共聚焦顯微鏡,超分辨率顯微鏡(3D-SIM,PALM, STED,STORM);

實驗結果改進示例:

實驗應用:

上圖:比較 HeLa 細胞系核表達的GFP-融合蛋白,GFP 信號增強(G FP-Booster_Atto488使用前和使用后)由用戶確定最適當的稀釋倍數。

EdU-Click-iT? 處理會導致GFP 信號的毀壞。 GFP-Booster標記了GFP 融合蛋白,因此有激活和加強熒光信號的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at RT) (GFP-Booster with EdU-Click-iT? protocol)。 下圖:GFP-Dnmt1 融合蛋白,三色熒光檢測,同時檢測  紅色:5’ EdU-Click-iT? Alexa Fluor 594信號;綠色,結合了GFP Booster 信號;藍色,DAPI 信號(在EdU-Click-iT? 處理后GFP Booster)

備注:Invtrogen新推出的Click-iT? EdU檢測也是以檢測新合成DNA中摻入的核苷類似物為基礎,但該方法所采用的核苷類似物是EdU,而且不是通過抗體檢測,而是基于一個click反應 --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應。Click-iT檢測避免了BrdU檢測所需的苛刻處理條件,可避免DNA變性,維持樣本的形態,因而提供了一種更可靠且更簡單的方法進行細胞增殖檢測。 

DAPI,是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料,常用與熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜,它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下,DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發。當DAPI與雙股DNA結合時,最大吸收波長為358nm,最大發射波長為461nm,其發散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。 所以不會影響綠色熒光蛋白的觀測。

 

 

產品三:Chromobodies;

 

ChromoTek公司的Chromobodies?是一種新的極其微小的細胞內功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfrom Evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結合域結構(VHH)。和普通抗體不同的是,這些創新的熒光納米探針可以使活細胞的結構和進程實時分析和可視化。因此,Chromobodies是做研究細胞內研究包含高含量分析(HCA)的一種新的理想試劑。

除了穩定細胞株,你也可以得到Chromobody?質粒,它允許你創建自己的細胞系或瞬時表達Chromobody?。

所有Chromobody?結合域都是經過精心挑選,以不干擾內源性蛋白質的功能,并提供了獨特的機會來標記活細胞中天然蛋白。

產品形式:質粒或者細胞系產品。

 

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